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【行业】检验杂学丙肝的实验室检测

来源:济南百博生物技术股份有限公司发表日期:2018-12-08 11:00:55浏览次数:0
 

 

HCV属于黄病毒科肝炎病毒属,其基因组为单股正链RNA,由约 9.6*103核苷酸组成。HCV基因组含有一个开放读框(ORF),编码10余种结构和非结构蛋白(NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B),NS3/4A、NS5A和NS5B是目前直接抗病毒药物DAA的主要靶位。据世界卫生组织统计,全球HCV的感染率约为2.8%,约1.85亿人感染HCV,每年因HCV感染导致的死亡病例约35万例。

 

但是,由于HCV感染具有隐匿性,多数感染者并并不知道已感染HCV,因此,全球确切的慢性丙型肝炎发病率尚不清楚。2006年我国血清流行病学调查显示,我国1~59岁人群抗-HCV流行率为0.43%,在全球范围内属HCV低流行地区,即我国一般人群HCV感染者约560万,如加上高危人群和高发地区的HCV感染者,约1000万例。全国各地抗-HCV阳性率有一定差异,以长江为界,北方0.53%高于南方0.29%。抗-HCV阳性率随年龄增长而逐渐上升,1~4岁组约为0.09%,50~59岁组可升至0.77%。

 

丙肝流行病学史:主要经血液传播

 

1.经输血和血制品传播,我国自1993 年对献血员筛查抗-HCV,2015年开始对抗-HCV阴性献血员筛查HCV RNA,经输血和血制品传播已很少发生。

 

2. 经破损的皮肤和黏膜传播,这是目前最主要的传播方式,包括使用非一次性注射器和针头、未经严格消毒的牙科器械、内镜、侵袭性操作和针刺等。在某些地区,因静脉注射毒品导致HCV传播占60%~90%。一些可能导致皮肤破损和血液暴露的传统医疗方法也与HCV传播有关;共用剃须刀、共用牙刷、纹身和穿耳环孔等也是HCV潜在的经血传播方式。与HCV感染者性接触和有多个性伴侣者,感染HCV的危险性较高。同时伴有其他性传播疾病者,特别是感染人类免疫缺陷病毒HIV者,感染 HCV的危险性更高。抗-HCV阳性母亲将HCV传播给新生儿的危险性约2%,若母亲在分娩时HCV RNA阳性,则传播的危险性可高达4%~7%;合并HIV感染时,传播的危险性增至20%。HCV高载量可能增加传播的危险性。接吻、拥抱、喷嚏、咳嗽、食物、饮水、共用餐具和水杯、无皮肤破损及其他无血液暴露的接触一般不传播HCV。

 

丙肝临床表现:大部分患者无明显症状和体征,部分患者有乏力、食欲减退、恶心、腹胀和右季肋部不适或疼痛。部分急性丙型肝炎患者可有轻度肝脾肿大,少数可伴低热或出现黄疸,部分可有关节疼痛等肝外表现。部分慢性丙型肝炎患者有肝病面容、黄疸、肝掌、蜘蛛痣及轻度肝、脾肿大。部分代偿期丙型肝炎肝硬化患者有肝病面容、肝掌、蜘蛛痣、黄疸及腹壁或食管、胃底静脉曲张,以及脾脏肿大和脾功能亢进。失代偿期丙型肝炎肝硬化患者有腹水、肝性脑病或消化道出血史。

 

丙肝自然史:暴露于HCV后1~3周,在外周血可检测到HCVRNA。急性 HCV感染者出现临床症状时,仅50%~70%抗-HCV阳性,3个月后约90%患者抗-HCV阳转。大约50% 的急性HCV感染者可自发清除病毒,多数发生于出现症状后的12周内。病毒血症持续6个月仍未清除者为慢性HCV感染,丙型肝炎慢性化率为55%~85%。病毒清除后,抗-HCV仍可阳性。HCV相关HCC发生率在感染30年后为1%~3%,主要见于肝硬化和进展期肝纤维化患者,一旦发展成为肝硬化,HCC 的年发生率为2%~4%。肝硬化和HCC是慢性丙型肝炎患者的主要死因。肝硬化失代偿的年发生率约为3%~4%。而肝硬化,10年生存率约为80%,如出现失代偿,10年的生存率仅为25%。 HCC在诊断后的第1 年,死亡的可能性为33%,丙型肝炎的自然史见下图。

 

丙肝实验室检查:

 

1. 生化学检查异常:急性丙型肝炎患者多有血清ALT、AST升高,部分患者有胆红素升高。部分慢性丙型肝炎和丙型肝炎肝硬化患者有ALT、AST及胆红素升高。

 

2. 抗体抗原检测:抗-HCV检测,包括化学发光法试验、酶联免疫吸附试验、胶体金法快速试验等,可用于HCV感染者的筛查,快速诊断测试可以被用来初步筛查抗-HCV。对于抗体阳性者,应进一步检测HCV RNA,以确定是否为现症感染。血清抗-HCV滴度越高,HCV RNA检出的可能性越大。一些自身免疫性疾病患者可出现抗-HCV 假阳性,血液透析和免疫功能缺陷或合并HIV感染者可出现抗-HCV 假阴性,急性丙型肝炎患者可因为抗-HCV检测处于窗口期出现抗-HCV阴性。因此,HCV RNA检测有助于确诊这些患者是否存在HCV感染抗原检测,在缺乏HCV RNA检测条件时,可考虑进行HCV核心抗原的检测,用于慢性HCV感染者的实验室诊断。

        

3. HCV RNA定量、基因分型和耐药相关基因检测:HCV RNA定量检测,用于对HCV抗体检测阳性样品的确诊及对高危人群样品筛查窗口期感染,并作为抗病毒治疗疗效的判断指标,指导抗病毒治疗及疗效判定。HCVRNA定量检测应当采用基于PCR扩增、灵敏度和精确度高并且线性范围广的方法,包括逆转录PCR、荧光定量PCR等,其检测结果采用IU/ml表示。HCV基因分型的方法有分子生物学和血清学两大类,前者包括DNA测序法、特异性引物扩增法、基因芯片、探针杂交等,后者是合成HCV特异性多肽来检测其特异性的抗体,以区分基因型,但不能区分亚型。HCV耐药相关基因检测,DAA单药治疗容易导致耐药的发生,目前检测耐药相关基因突变的方法有DNA测序法,包括PCR产物直接测序法、新一代深度测序方法,以及体外表型分析法,即测定抑制病毒复制所需的药物浓度,如EC50或EC90。目前已确认的耐药相关突变位点主要有:NS3/4A靶点相关:V36M、T54A、Q80K、R155K、A156T和D168V,NS5A 靶点相关:M28T、Q30E/H/R、L31M、H58D和Y93H/N,NS5B靶点相关:S282T、C316N/H/F、M414T、A421V、P495L/S和S556G等。抗-HCV与HCVRNA检测结果的临床意义见下表。

 

-HCV

HCV RNA

临床意义

阳性

阳性

HCV 现症感染

阳性

阴性

提示既往感染,或治疗后 HCV 清除

阴性

阳性

急性 HCV 感染早期,或各种原因导致的免疫功能低下的 HCV 感染者

阴性

阴性

未感染 HCV

 

目前尚无有效的预防性丙型肝炎疫苗可供使用。国内外部分指南给出的建议为:

 

1. 筛查:建议对所有丙型肝炎病毒高感染率人群或有HCV暴露史或危险行为的人群提供HCV抗体检测服务;建议对所有HCV抗体检测阳性者进行RNA检测,确诊慢性丙型肝炎患者。

 

2. 关怀:建议对所有HCV感染者提供酒精饮用评价,并对中高度酒精饮用者进行酒精降低行为干预;建议在资源有限地区,通过非侵入性的天门冬氨酸氨基转移酶与血小板比值指数APRI或纤维化指标FIB4检测评价肝纤维化程度。

 

3. 治疗:建议所有慢性HCV感染者,包括成人、儿童和静脉吸毒者,都应接受抗病毒治疗的评价;建议用聚乙二醇干扰素联合利巴韦林治疗慢性丙型肝炎患者,不推荐使用普通干扰素联合利巴韦林的治疗等。

 

学习亮点:

 

HCV RNA定量检测目的:用于对HCV抗体检测阳性样品的确诊及对高危人群样品筛查窗口期感染,并作为抗病毒治疗疗效的判断指标,指导抗病毒治疗及疗效判定。

 

职业暴露:指医务人员在从事临床诊疗、护理及科学实验等职业活动过程中被物理、化学或生物等有害因素影响,直接或间接地对人体健康造成损害的情况。